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人可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)elisa試劑盒參數：

人可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)elisa試劑盒技術流程ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。 ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。然而，影響Elisa試驗結果的因素很多，故加強各個環節的質量保證才能充分發揮其方法學的優點。

主要優點1、簡易操作、高效、靈敏、特異的抗體；2、穩定的重復性和可靠性；3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；4、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類型；5、節省實驗經費。

使用方法1、 血清：操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。2、 血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、 細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。5、 保存：如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。操作步驟1：雙抗體夾心法1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。3.　加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。4.　加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。5.　終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。6.　結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。操作步驟2：間接法1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；2.次日洗滌3次；3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml；5.37℃孵育30-60分鐘，洗滌；6.’最后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

標本要求1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

應用信息ELISA法是免疫診斷中的一項新技術，現已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據已經使用的結果，認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查，而且由于一天之內可以檢查幾百甚至上千份標本,因此，也適合于血清流行病學調查。本法不僅可以用來測定抗體，而且也可用于測定體液中的循環抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫學各領域的應用范圍日益擴大，可概括四個方面：1、免疫酶染色各種細胞內成份的定位。2、研究抗酶抗體的合成。3、顯現微量的免疫沉淀反應。4、定量檢測體液中抗原或抗體成份。編輯本段進口分裝進口分裝：檢測范圍和靈敏度不同，用量少時，可使用分裝，前期是它的長久性不是很好。試劑盒的標準曲線最高點OD 值均在2.0±0.2，零孔的OD 值都控制在0.10以下。試劑盒的標準曲線相關系數R≥0.99。試劑盒重復性好，板內、板間變異系數均小于9 %。試劑的組份都多給20%的富余量，確保完成48/96孔的檢測，避免分次檢測可能造成試劑量不足的情況。檢測抗體及酶結合物的稀釋度合適(均為1:30), 方便試驗操作者準確地做稀釋工作，保證實驗結果的重復性。白介素6是一種細胞因子,已被證實為B細胞分化因子.它是一種抗體形成系統,它的生理特性,如肝細胞急性蛋白合成的誘導和基于和白介素3協同作用的生長刺激等,也備受關注. 并且已證實白介素-6與病理學存在穩定的相關關系.例如,報道多種疾病的生長因子為白介素-6, 骨髓瘤細胞能合成白介素-6并表達白介素-6受體.此外, 白介素6在多種炎性疾病和自身免疫疾病發揮重要的作用. 此試劑盒能高靈敏度的檢測小鼠血清和細胞基質上清的白介素6 原理 此試劑盒運用了兩種特異性抗體,洗板后加入TMB底物液顯色,顯色的強度與小鼠的白介素-6的量成正比. 檢測范圍 10.94  700 pg/mL [2]預期用途此IBL試劑盒能用于小鼠血清,EDTA血漿,細胞上清中白介素-6的定量檢測試劑盒成分1 預包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 96T2 酶標記抗體: (30倍濃縮)HRP標記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 0.4mL x 13 標準品: 重組小鼠白介素-6 0.5mL x 2 4 EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 15 標記抗體稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 16 顯色劑: TMB底物液 15mL x 17 終止液: 1N硫酸 12mL x 18 濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1 操作說明 1實驗所需器材(但試劑盒沒有提供) 酶標儀(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及燒杯 去離子水 冰箱(4°C) 坐標紙(log/log) 吸水紙 試管(用于標準品稀釋) 溫育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性試劑管(用于濃縮酶標記抗體和顯色劑)[3]

注意事項1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。4． 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值大于標準品孔第一孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物請避光保存。7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9．本試劑不同批號組分不得混用。10.保存條件及有效期：1．試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6 個月

熒光定量PCR檢測技術從誕生到現在已經有 8 年了，但是其應用在近四年才迅猛增長。在Medline 數據庫中，用“ Taqman” 或 ”real time PCR”作為關鍵詞檢索，在1996年僅有19篇，在1997年僅有28篇，在98 、 99 、2000 年分別達到了52 、157 、409篇， 2003年已經達到2984篇，相信在不久的將來會有更多的文章發表。針對實時 PCR 這一熱點領域，閃晶公司對它進行了深入細致的研究，并且及時地為廣大科研人員推出這項技術服務。

熒光定量PCR基本原理 •  Taqman 技術：該技術以美國 ABI 公司為代表。 PCR 擴增時，在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針。該探針為一直線型的寡核苷酸，兩端分別標記一個熒光報告基團和一個熒光淬滅基團，探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收， PCR 儀檢測不到熒光信號； PCR 擴增時（在延伸階段）， Taq 酶的 5＇ － 3＇ 外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條 DNA 鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與 PCR 產物形成完全同步，這也是定量的基礎所在。

相關鏈接......ABI公司Taqman探針MGB探針Sybr green I染料ROX染料Taq酶（熒光定量PCR專用）熱啟動酶熱啟動熒光PCR定量核心試劑盒熒光定量PCR一步法RT－PCR試劑盒TrizolRNA提取試劑UNG酶標準品克隆定點突變亞克隆dUTP

•  Beacon 技術：該技術以美國人 Tagyi 為代表。也是加入了熒光探針，但它是 環狀的寡核苷酸探針，分別由莖部和環部組成， 兩端分別標記 熒光報告基團和熒光猝滅基團，在無靶序列的情況下，探針始終是環狀，報告基團的熒光被猝滅基團猝滅，使熒光檢測儀檢測不到熒光信號；而在有靶序列時，即在 PCR 的退火階段探針與靶序列結合，使熒光報告基團和猝滅基團分開，這樣熒光儀可以檢測到熒光，熒光信號的強弱代表了靶序列的多少。

相關鏈接......分子信標知識介紹

•  FRET 技術：該技術以 Roche( 羅氏公司 ) 為代表。它的基本原理是：兩條直線型寡核苷酸探針，其中一條的 3 ‘端標記熒光激發基團，另一條的 5 ＇ 端標記熒光檢測基團，在無靶序列的情況下，兩條探針分開，無法進行能量的傳遞，這樣熒光儀不能檢測到熒光信號；而當有靶序列時，即在 PCR 的退火階段兩條探針與靶序列結合，使得兩條探針上的熒光基團可以進行能量的傳遞，這樣熒光儀就可以檢測到熒光信號，熒光信號的強弱代表了靶序列的多少。

實時熒光定量PCR中的幾個俗語 •  Ct 值：是指每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數。（如圖所示）

•  熒光域值（ threshold ）：是指 PCR 反應的前 15 個循環的熒光信號，熒光域值的缺省設置是 3-15 個循環的熒光信號的標準偏差的 10 倍，即： threshold.•  Ct 值與起始模板的關系：研究表明，每個模板的 Ct 值與該模板的起始拷貝數的對數存在線性關系〔 1 〕，起始拷貝數越多， Ct 值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線，其中橫坐標代表起始拷貝數的對數，縱坐標代 Ct 值（如圖 2 所示）。因此，只要獲得未知樣品的 Ct 值，即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。

熒光定量PCR應用廣泛 •  可以對各種基因的表達進行定量分析，如：同一基因在不同組織中的表達差異、同一基因在不同藥物處理后的表達差異、轉基因食品的檢測。過去最常用的高通量篩選基因表達差異的技術是 cDNA 芯片和差異顯示，但這兩種技術的缺點是只能定性而非完整意義上的定量分析。實時 PCR 技術和高通道實時 PCR 儀的出現，無疑為這種檢測提供了極大的方便。 •  可以進行點突變分析和等位基因分析，用不同的熒光報告基團標記 Taqman 探針，然后分別與野生型和突變型雜交，如果一種熒光信號明顯強于另一種熒光信號，則表明它是純合子；如果兩種熒光信號都明顯增強，則表明它是雜合子。另外分子信標（ Molecular Beacon）就是專門為這種技術設計的探針。 •  可以進行單核苷酸多態性的分析，檢測單核苷酸多態性對于研究個體對不同疾病的易感性或者個體對特定藥物的不同反應有著重要的意義，因分子信標結構的巧妙性，一旦 SNP 的序列信息是已知的，采用這種技術進行高通量的 SNP 檢測將會變得簡單而準確。 •  可以進行 DNA 甲基化檢測， DNA 甲基化同人類的許多疾病有關，特別是癌癥， Laird 報道了一種稱作 Methylight 的技術，在擴增之前先處理 DNA ，使得未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不受影響，用特異性的引物和 Taqman 探針來區分甲基化和非甲基化的 DNA ，這種方法不僅方便而且靈敏度更高。 •  對傳染性疾病進行定量定性分析，這在我國應用比較廣泛，大家比較熟悉。許多生產臨床PCR 試劑的廠商已經陸續推出了一系列的診斷試劑，如：肝炎系列、性病系列、腫瘤系列等等。

熒光定量PCR技術服務  (含lncRNA熒光定量PCR-環狀RNA熒光定量PCR)熒光定量PCR用Taqman方法對DNA/RNA進行real time PCR的定量測定或型的鑒定。

熒光定量PCR服務要求1. 請您提供新鮮的且盡量多的材料(各種材料的RNA提取量請參照“總RNA 的提取”），或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/ 樣品）；（各種材料的DNA提取量請參照“ DNA的提取”），或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/ 樣品)。 2. 請通過E-mail提供已知的全長基因序列。3. 請提供盡可能詳細的背景資料：DNA/ RNA來源、豐度等

熒光定量PCR操作程序 1. 根據基因序列設計特異性的引物和熒光探針。 2. 提取DNA/RNA 。 3. Real Time PCR(熒光定量PCR)，進行實驗結果分析 4. 實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料 

熒光定量PCR收費標準 1、RNA提取：10－20個樣品的RNA提取是：150元/個；20－30個樣品的RNA提取是：120 元/個；30個以上樣品的RNA提取是：100元/個；每份材料最少應提供：100mg/樣品2、一個指標每個樣品為150元；二個指標每個樣品為240元；三指標每個樣品為300元，三個指標以上每個樣品為80元/反應。3、引物合成為每個堿基2.1元，探針標記為1200元/條，如果是用sybr green I(染料)做，則免去探針的費用，染料贈送。4、內參的GAPDH引物探針免費，標準曲線免費贈送。5、不再收取任何的基礎費或者開機費。

人（sEPCR）kit,可溶性血管內皮細胞蛋白C受體Elisa試劑盒本試劑僅供研究使用 Elisa kit規格：48孔配置/96孔配置標準品稀釋液：1.5ml×1瓶酶標試劑：3 ml×1瓶（48）/6 ml×1瓶（96） 

特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的，且與其他相關蛋白無交叉反應。有效期：6個月預期應用：ELISA法定量測定血清、血漿、細胞培養上清或其它相關生物液體中的含量。

人（sEPCR）kit,可溶性血管內皮細胞蛋白C受體Elisa試劑盒樣本處理及要求：1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

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【產品名稱】Gene-Explorer國產雙槽智能普通型基因擴增儀PCR儀

【產品型號】Gene-Explorer雙槽智能：GE9611/4831/6021/3841/4851

【關鍵詞】PCR儀,擴增儀，基因擴增儀,PCR基因擴增儀，PCR儀

【產品介紹】

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